91porn最新地址 铁死亡扼制剂调养原发性卵巢功能不全
发布日期：2024-11-04 05:54 点击次数：91
91porn最新地址91porn最新地址 原发性卵巢功能不全（POI）是一种以原始卵泡过早阑珊为特征的卵巢功能阻扰的临床玄虚征。POI能引起不孕不育、严重的过去活命繁芜和长久的健康风险。关系词，POI的潜在机制在很猛经过上仍不涌现。本文揭示了基于BNC1舛误的POI的病理机制91porn最新地址，领导YAP和铁死亡扼制剂在POI调养中的潜在价值。本文于2022年10月发表在《Nature Communications》IF：17.694期刊上。
本事道路：
主要本质完了：
1、Bnc1截断突变导致卵泡过度激活和闭锁
为细目Bnc1突变对卵泡发生的影响，从用10 IU孕母马血清促性腺激素（PMSG）超排卵的4周龄和12周龄小鼠中网罗生发囊（GV）卵母细胞，比较野生型（Bnc1tr/tr）和Bnc1纯合子突变（WT，Bnc1+/+）的卵泡发生的变化。完了自大与WT小鼠比较，Bnc1突变小鼠的卵母细胞增多，但卵巢反馈随年齿的加多而下跌（Fig. 1a–b）。作家猜思Bnc1tr/tr小鼠的卵巢储备也跟着年齿的增长而下跌。为考据该猜思，比较WT和Bnc1tr/tr小鼠在降生后1天（PD1）和3, 4, 12, 16周时的卵泡数目。完了自大，与WT比较，Bnc1tr/tr小鼠的卵泡数目在PD1时无各别（Fig. 1c），在3周时卵泡数目减少，卵泡过度激活，但未不雅察到卵泡闭锁（Fig. 1d），在4周时亦然（Fig. 1e）。在12和16周时，表型和4周时肖似，然而还不雅察到闭锁卵泡数目显贵加多，而原始卵泡耗竭率下跌（Fig. 1f, g）。总之，这些数据标明，在具有Bnc1突变的小鼠POI模子中，卵泡过度激活（Fig. 1h-i），闭锁卵泡数目跟着年齿的增长而加多。
图1 Bnc1突变影响卵泡发育
2、条款敲除卵母细胞中Bnc1可通过卵泡过度激活和卵泡闭锁不异POI
采选Fig. 2a的才略构建聘用性敲除卵母细胞Bnc1的小鼠，完了自大Bnc1突变小鼠的卵巢分量/体重比和卵巢大小均小于WT小鼠（Fig. 2b），况兼突变小鼠都不孕（Fig. 2c）；组织学和时势分析自大Bnc1突变小鼠卵巢卵泡数目减少（Fig. 2d）；这种表型领导BNC1在卵母细胞中起作用，并在原始卵泡期起作用。此外，聘用性敲除卵母细胞Bnc1的小鼠的卵巢动态变化和Bnc1tr/tr小鼠的肖似，其卵泡数目减少，卵泡过度激活和卵泡闭锁（Fig. 2e-g）。这些数据标明，在卵母细胞特异性敲除Bnc1的小鼠中，卵泡被过度激活，闭锁卵泡的数目加多。
图2 Bnc1通过影响卵母细胞影响卵泡发育
3、Bnc1突变通过非凋一火性细胞死亡不异卵泡闭锁
由于文件报说念细胞凋一火参与了卵泡闭锁，是以作家思细目细胞凋一火是否参与了Bnc1突变小鼠的卵巢卵泡闭锁。关系词，WB完了自大WT和Bnc1tr/tr小鼠的卵巢中这些凋一火记号物的抒发无各别（Fig. 3a-b）。Annexin V染色也自大WT小鼠和卵母细胞特异性敲除Bnc1小鼠在早期的细胞凋一火方面无各别（Fig. 3c）。肖似地，DNA毁伤记号物也在两种小鼠间无各别（Fig. 3d）。这些完了标明Bnc1突变小鼠的卵泡闭锁不是通过由凋一火介导而是通过非凋一火细胞死亡通路完了的。
图3 Bnc1突变通过非凋一火性细胞死亡不异卵泡闭锁
4、颠倒的脂质代谢和铁死亡参与卵泡闭锁
为揭示Bnc1突变导致卵泡闭锁的分子机制，对卵巢组织进行RNA测序，共计赢得523个各别抒发基因（Fig. 4a）。KEGG和GSVA揭示比较于WT小鼠，突变小鼠的卵巢阐扬出脂质代谢繁芜（Fig. 4b, c）。此外，卵母细胞Smart-seq赢得了肖似的完了，共计成绩4554个各别抒发基因（Fig. 4d, e），GO分析领导他们参与颠倒的线粒体功能和脂质代谢受损（Fig. 4f, g），KEGG自大它们参与Hippo和铁死亡通路（Fig. 4h, i）。鉴于线粒体介导的脂质过氧化是铁死亡的关节，是以这些完了领导铁死亡可能参与Bnc1突变导致的POI进展。
图4 Bnc1突变可能通过铁死亡不异卵泡闭锁
5、Bnc1突变导致的卵泡闭锁是由铁死亡介导
为表征Bnc1突变是否导致卵母细胞铁死亡，采选透射电镜和扫描电镜不雅察突变小鼠的GV卵母细胞，完了发现Bnc1突变导致过多的脂质积贮（Fig. 5a）；线粒体分散颠倒，皆集颠倒；线粒体膜的密度加多（Fig. 5b）；GV卵母细胞和小鼠卵巢的尼罗红染色也确认了脂质积贮（Fig. 5c）。此外，聘用性敲除卵母细胞Bnc1的小鼠和Bnc1tr/tr小鼠的卵母细胞中ROS和MitoSOX的水平均显贵加多（Fig. 5d, e），且在卵母细胞中发现线粒体分散舛误，线粒体位于细胞膜下方（Fig. 5e）。JC-1染色自大两种突变鼠卵母细胞中的线粒体膜电位光显升高（Fig. 5f）。两种突变鼠卵母细胞中的脂质ROS产量也显贵加多（Fig. 5g），而GPX4的抒发显贵下跌（Fig. 5h, i），Nox1和Cox2的抒发加多，其余铁死亡记号物的抒发也颠倒变嫌（Fig. 5j）。进一步筹商发现。铁死亡不异剂RLS3和扼制剂Fer-1可分歧显贵增强或扼制Bnc1舛误不异的小鼠卵母细胞脂质过氧化（Fig. 5k）。说七说八，这些完了标明，卵母细胞的Bnc1突变和敲除可不异铁死亡。
图5受Bnc1突变影响的卵母细胞对铁死亡愈加明锐
6、BNC1短缺通过NF2-YAP蹊径激发卵母细胞铁死亡
为磋议Bnc1缺失不异卵母细胞铁死亡的分子机制，进行了ChIP-seq，发现NF2可能是Bnc1的靶基因。据文件报说念敲除NF2和激活Hippo可促进铁死亡。是以作家磋议了Bnc1缺失是否通过调控NF2不异卵母细胞铁死亡。ChIP-qPCR和双荧光素酶本质都确认了Bnc1可与NF2的运行子区域荟萃（Fig. 6a, b）。此外，运行子缺失考试细目片断（1-500 bp）是Bnc1调控Nf2所需的（Fig. 6b）。免疫荧光和免疫组化完了自大，比较于WT小鼠卵巢，Bnc1tr/tr小鼠的卵母细胞中NF2的抒发显贵下跌，YAP的矍铄位及卑劣基因TFRC和ACSL4的抒发显贵加多（Fig. 6c-g）；Fe2+含量显贵加多（Fig. 6h）。过量铁依赖的PUFA的过氧化可不异铁死亡。靶向脂质组学揭示比较于WT小鼠，Bnc1突变小鼠卵母细胞中PUFA组分的水平显贵加多，如(PE) (18:1/18:2)，PE (16:0/20:4)，PE (18:2/18:2)，PE (18:1/20:4)，(PS) (14:0/20:4)和(PI)(18:0/18:2)（Fig. 6i）。这些完了标明，Bnc1靶向NF2介导Hippo-YAP通路，参与铁死亡的调控。
图6 Bnc1截断突变通过调度NF2-YAP信号使卵母细胞对铁死亡明锐
7、靶向NF2-Hippo/YAP通路解救Bnc1突变不异的铁死亡
为进一步磋议Bnc1通过调控NF2介导铁死亡的分子机制，将Nf2 mRNA微打针到GV卵母细胞中，然后检测NF2和活化的YAP的水平。完了自大补充Nf2 mRNA后Bnc1tr/tr小鼠卵母细胞中NF2的抒发显贵加多，而核YAP的水平显贵减少（Fig. 7a）。然后检测了YAP特异性扼制剂VP靶向YAP的后果。完了自大，与Bnc1tr/tr小鼠比较，打针VP的Bnc1tr/tr小鼠的原始卵泡的数目加多，过度激活
的卵泡减少（Fig. 7b），TFRC和COX2的抒发下跌（Fig. 7c, d），Fe2+含量显贵下跌（Fig. 7e），脂质过氧化下跌（Fig. 7f）。以上完了标明靶向NF2-Hippo/YAP通路可解救Bnc1突变不异的铁死亡。
图7靶向NF2-Hippo/YAP信号通路解救Bnc1突变不异的铁死亡
8、扼制铁死亡改善Bnc1突变不异的POI
临了作家磋议了铁死亡扼制剂Fer-1对小鼠POI的药理改善作用。完了如图8所示，与Bnc1tr/tr小鼠比较，Fer-1处治的Bnc1tr/tr小鼠的卵巢分量加多，卵巢/体重比升高（Fig. 8a, b），闭锁卵泡数目无显贵变化（Fig. 8c），繁芜发情周期的执续时候裁减（Fig. 8d），脂质过氧化水平下跌（Fig. 8e），GPX4抒发升高和COX2抒发升高（Fig. 8f）。这些完了标明Fer-1阻断铁死亡可改善Bnc1缺失引起的POI。
图8 Fer-1可部分改善Bnc1截断突变的POI表型
总之，BNC1成功调控Nf2的抒发。BNC1缺失下调NF2抒发，贬低YAP磷酸化，促进YAP核积贮。YAP的激活上调了Tfrc和Acsl4的抒发，随之而来的是铁的经受加多和脂质ROS的产生增强，最终导致卵母细胞铁死亡（图9）。
图9 BNC1-Merlin-Hippo-YAP signaling-Ferroptosis信号轴知道图。
参考文件：
Wang Feixia., Liu Yifeng., Ni Feida., Jin Jiani., Wu Yiqing., Huang Yun., Ye Xiaohang., Shen Xilin., Ying Yue., Chen Jianhua., Chen Ruixue., Zhang Yanye., Sun Xiao., Wang Siwen., Xu Xiao., Chen Chuan., Guo Jiansheng., Zhang Dan.(2022). BNC1 deficiency-triggered ferroptosis through the NF2-YAP pathway induces primary ovarian insufficiency. Nat Commun, 13(1), 5871. doi:10.1038/s41467-022-33323-8